熒光定量基因擴增儀的相關(guān)知識點介紹
更新時間:2022-08-22 點擊次數(shù):591
熒光定量基因擴增儀原理:以探針法熒光定量PCR為例:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。開始時,探針完整地結(jié)合在DNA任意一條單鏈上,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收,檢測不到熒光信號;PCR擴增時,Taq酶將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。
傳統(tǒng)的PCR進行檢測時,擴增反應(yīng)后需要進行染色處理及電泳分離,并且只能作定性分析,不能準確定量,易造成污染出現(xiàn)假陽性,使其應(yīng)用受到限制。實時定量PCR技術(shù)不僅實現(xiàn)了對模板的定量,且具有靈敏度高、特異性和可靠性更好、自動化程度高和無污染的特點,使得熒光定量PCR逐漸取代常規(guī)PCR。
在PCR擴增反應(yīng)的數(shù)個循環(huán)里,熒光信號變化不大,接近一條直線,這樣的直線即是基線,這條線是可以自動生成也可以手動設(shè)置的。之后反應(yīng)會進入指數(shù)增長期,這個期間擴增曲線具有高度重復(fù)性,在該期間,可設(shè)定一條熒光閾值線,它可以設(shè)定在熒光信號指數(shù)擴增階段任意位置上,但一般會將熒光閾值的缺省設(shè)置是3-15個循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10倍。每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達設(shè)定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)被稱為CT值,這個值與起始濃度的對數(shù)成線性關(guān)系,且該值具有重現(xiàn)性。
熒光定量基因擴增儀主要用于用于科研及臨床的基因擴增、定性PCR基因擴增、熒光/酶免終點定量DNA基因擴增、基因芯片等其他基因分析應(yīng)用的基因擴增等?;驍U增儀適合國內(nèi)外各種PCR試劑盒傳染病類、腫瘤類、科研類。進口基因擴增儀主要由外殼、變溫反應(yīng)腔、散熱系統(tǒng)、加熱系統(tǒng)、制冷系統(tǒng)、電子控制系統(tǒng)、供電系統(tǒng)、人機界面等各部分組成?;驍U增儀廣泛應(yīng)用于各級各類醫(yī)療機構(gòu)、大學及研究所、CDC、檢驗檢疫局、獸醫(yī)站、食品企業(yè)及乳品廠等。